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Calcein-AM/PI活死細胞雙染試劑盒
- names：
Calcein-AM/PI Double Staining Kit
- CAS號：
MDL Number： - MF(分子式)： Calcein-AM/PI MW(分子量)： N/A
- EINECS: Reaxys Number:
- Pubchem ID: Brand:BIOFOUNT
| 貨品編碼 | 規(guī)格 | 純度 | 價格 (￥) | 現(xiàn)價(￥) | 特價(￥) | 庫存描述 | 數(shù)量 | 總計 (￥) |
|---|
| 中文別名 | 活死細胞雙染試劑盒 |
| 英文別名 | Calcein-AM/PI Double Staining Kit |
| CAS號 | |
| Inchi | NA |
| InchiKey | NA |
| 分子式 Formula | Calcein-AM/PI |
| 分子量 Molecular Weight | N/A |
| 溶解度Solubility | |
| 性狀 | 溶液形式 |
| 儲藏條件 Storage conditions | -4℃低溫避光保存 |
Calcein-AM/PI細胞雙染試劑盒 熒光特性：
Calcein-AM : λex=490 nm , λem=515 nm
PI : λex=530 nm , λem=580 nm
Calcein-AM/PI細胞雙染試劑盒 染色案例：
細胞染色實例
（a） （b） （c）
1. Calcein-AM染FTC細胞（活細胞單染）
2. PI染HCT116細胞（死細胞單染）
3. Calcein-AM、PI染MHD-1 細胞（活死細胞雙染）
Calcein-AM/PI 最適濃度:
由于不同細胞種類、細胞濃度的染色條件不同，我們建議自行摸索一下Calcein-AM和PI的最適濃度。
Calcein-AM和PI的最佳濃度是根據(jù)不同的細胞種類而定，通過以下的操作，我們可以找到不同細胞染色試劑的最佳濃度：
1. 通過在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黃皂苷中培養(yǎng)10 min或通過在70%乙醇中培養(yǎng)30 min制備死細胞。
2. 用0.1-10 μM PI溶液染死細胞，以便找到僅針對細胞核染色而不對細胞質(zhì)染色的PI濃度。
3. 用0.1-10 μM Calcein-AM溶液染死細胞，以便找到不對細胞質(zhì)染色的Calcein-AM濃度，再以此濃度的Calcein-AM對活細胞染色以檢驗活細胞是否被染色。
Calcein-AM/PI細胞雙染試劑盒 實驗步驟
以HeLa細胞為例
制備1 mmol/l的Calcein-AM儲存液
【500 次】
將200 μl DMSO加入到含200 μg Calcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。
【3000 次】
將1 ml DMSO加入到含1 mg Calcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。
※Calcein-AM儲存液需要避光，在-20℃密封保存。
使用方法
1. 工作液的配制
1.1 1×Assay Buffer（反應緩沖液）的配制
從低溫冰箱內(nèi)取出10×Assay Buffer，根據(jù)單次用量無菌條件取出適量，用去離子水（dH2O）做10倍稀釋以得到1×Assay Buffer。
注意：低溫情況可能有析出現(xiàn)象，可在室溫情況下?lián)u勻使用。
1.2 1×染色工作液的配制
1）先將低溫保存的Calcein-AM溶液 (2 mM)和PI溶液（1.5 mM）回到室溫20-30 min。
注意：第一次使用可對母液進行分裝，以減少反復凍融次數(shù)。
2. 染色步驟
2.1 對于貼壁細胞，先用細胞刮刀或者胰酶-EDTA消化細胞，之后離心收集細胞（1000 rpm，3 min）。
對于懸浮細胞，直接離心（1000 rpm，3 min）收集細胞。
2.2 去上清，用1×Assay Buffer充分清洗細胞2~3次，以充分去除殘留的酯酶活性。
2.3 用1×Assay Buffer制備細胞懸液，使其密度為1×105~1×106細胞/mL。
2.4 取100 µL染色工作液加入200 µL細胞懸液內(nèi)，混勻，37℃孵育15 min。
注意：如果需要，可延長孵育時間至30min。
2.5 熒光顯微鏡下使用490±10 nm激發(fā)濾片同時檢測活細胞（黃綠色熒光）以及死細胞（紅色熒光）。另外，使用545 nm的發(fā)射濾片僅能觀察到死細胞。也可以直接在熒光酶標儀下使用合適的濾片進行檢測。
注意：可以使用以下方法來優(yōu)化得到兩種熒光染料的最佳工作濃度。
a）用0.1%皂素或者0.1-0.5%地高辛孵育細胞10 min，或者用70%乙醇孵育細胞30 min，從而制備死細胞；
b）用0.1-10 µM的PI溶液進行死細胞染色，以得到僅僅對細胞核染色，而不會對細胞質(zhì)染色的最佳工作濃度。
c）用0.1-10 µM的Calcein-AM進行死細胞染色，以得到不會對細胞質(zhì)染色的最佳工作濃度。然后用此濃度進行活細胞染色，去觀察是否活細胞能被染色。
實驗注意事項
1. 由于本試劑盒中的Calcein-AM Reagent 粉末和PI Stock Solution量很少，有可能會粘在蓋子或管壁上，開封前請先渦旋以使其振落下來。
2. 由于Calcein-AM儲存液對潮氣敏感，請在使用后密閉Calcein-AM儲存液的蓋子。如果不能一次用完，建議分裝保存，例如分裝成10 μl/管，用封口膜封口，并用鋁箔紙包裹，放在一個密閉性能好的塑料袋中，并放入一包干燥劑，在≤-20℃密封避光保存。
3. 配制好的染色工作液請在當天使用。
4. PI有疑似致癌性，使用前應注意以下幾點：
a.使用時請帶好手套，口罩，防護眼鏡等，不要接觸到或呼吸到。
b.當PI不慎接觸到皮膚時，請立刻用大量的水沖洗。
c.處理方法
清洗容器的清洗液和廢液請按照實驗室的有毒有害物質(zhì)的處理方法進行處理，或按照以下方法處理：
用UV照射的方法進行分解
用次氯酸鈉氧化分解后，進行中和處理
| 產(chǎn)品說明 | Calcein-AM/PI細胞雙染試劑盒內(nèi)含兩種染料：Calcein-AM和Propidium Iodide (PI)。該試劑盒可以在熒光顯微鏡下同時觀察在同一個細胞培養(yǎng)皿中的活細胞和死細胞。Calcein-AM可透過細胞膜，通過活細胞內(nèi)的酯酶作用脫去AM基團，產(chǎn)生的Calcein (鈣黃綠素) 發(fā)出強綠色熒光，因此活細胞在熒光顯微鏡下可被檢測到綠色熒光。 |
| Introduction | |
| Application1 | |
| Application2 | |
| Application3 |
| 1. 4D-Printed Biodegradable and Remotely Controllable Shape Memory Occlusion Devices, Advanced Functional Materials, 2019, 29(51), 1906569 |
| 2. Nanoenzyme-Augmented Cancer Sonodynamic Therapy by Catalytic Tumor Oxygenation, ACS Nano, 2018, 12(4), 3780-3795 |
| 3. A strongly adhesive hemostatic hydrogel for the repair of arterial and heart bleeds, Nature Communications, 2019, 10(1), 2060 |
| 4. Wnt Inhibitor Dickkopf-1 as a Target for Passive Cancer Immunotherapy, Cancer Research, 2010, 70(13), 5326-36 |
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