ActinRed 555（細(xì)胞骨架紅色熒光探針）

ActinRed 555 Probes 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備材料：
1. （可選）甲醇
2. 1×PBS 緩沖液, pH 7.4, 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別（貨號(hào)：HC0016）
3. 固定液 4%多聚甲醛（溶于 PBS 緩沖液）
4. 丙酮或透化液 0.5% Triton X-100（溶于 PBS 緩沖液）
5. Fluoromount-GTM   水溶性封片劑（不含 DAPI），DAPI（貨號(hào)：SC0382）
6. 可選）DAPI Fluoromount-GTM  水溶性封片劑（含 DAPI）
7. （可選）BSA，標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別（貨號(hào)：SS2164）
8. 載玻片和蓋玻片
9. 蓋玻片周圍密封液（如透明指甲油）
10. 組裝有 TRITC 激發(fā)/發(fā)射濾片，以及 DAPI 激發(fā)/發(fā)射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡。

1. ActinRed 555 Probes（300T）
本品以溶于甲醇的 20µM 儲(chǔ)存液形式提供，總量為 300µL。按照 100 nM 的工作液濃度來換算，可制備總量為 60 mL 的工 作液。建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對(duì)母液進(jìn)行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。
開始實(shí)驗(yàn)前，使用 1×PBS 緩沖液稀釋儲(chǔ)存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2. ActinRed 555 Probes（1mg）

本品以凍干粉形式提供，分子量為 1231.4，總量為 1mg?？上扔眉状蓟蛘?DMSO 充分溶解配制成 20~100µM 的儲(chǔ)存液。 如，加入 8.1208mL 甲醇到 1mg 該品即得到 100µM 等量的儲(chǔ)存液，根據(jù)單次使用量，進(jìn)行小量分裝，-20℃避光凍 存，一年穩(wěn)定。
開始實(shí)驗(yàn)前，使用 1×PBS 緩沖液稀釋儲(chǔ)存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用

ActinRed 555 ReadyProbes 染色方法：
注意：對(duì)于某些特定的實(shí)驗(yàn)體系，我們提供的染色方案可能需要優(yōu)化。但在大多數(shù)情況下，按照本操作說明可取得一致的結(jié)果。
以下方法以細(xì)胞爬片的染色步驟為例：
1. 用 PBS（pH7.4）輕輕洗滌細(xì)胞爬片。
2. 用 3.7%的多聚甲醛（PBS 配制）室溫固定細(xì)胞，時(shí)間為 10 分鐘。
注意：甲醇在固定過程中可能會(huì)破壞細(xì)胞肌動(dòng)蛋白，因此**避免任何含甲醇的固定劑。首選的固定劑是不含甲醇的多聚甲醛溶液。
3. 用 PBS 清洗細(xì)胞樣品兩遍或以上。
4. 將細(xì)胞爬片至于干凈的玻璃培養(yǎng)皿中，用含 0.1% Triton X-100 的 PBS 緩沖液室溫透化樣本，處理時(shí)間 3-5 分鐘。（也可使用丙酮溶液透化處理，但需至于-20℃）
5. 用 PBS 清洗細(xì)胞樣品兩遍或以上。
6. 用含 1% BSA 的 PBS 封閉細(xì)胞，時(shí)間為 20-30 分鐘。
7. 向細(xì)胞爬片上滴加兩滴 ActinRed 555 Probes，室溫避光孵育 30 分鐘。為避免染料蒸發(fā)，請(qǐng)將爬片置于密閉的濕盒中。
8. 用 PBS 清洗細(xì)胞樣品兩遍或以上。
9. 如需長(zhǎng)期保存，請(qǐng)將細(xì)胞樣品至于空氣中自然晾干，并用封片劑封片。儲(chǔ)存于 2-6℃避光環(huán)境下的樣品正?？芍辽俦４姘肽?。